晚期非小细胞肺癌中ERCC1、β—tubulin3及TOPOⅡ的表达与临床病理特征及铂类化疗疗效的关系

材料与方法

1.1一般资料

选取2012年1月～2013年6月在我院治疗的61例住院患者作为研究对象，所有患者均通过病理确诊为NSCLC，均为初诊治疗。其中男性45例，女性16例；年龄46～75岁，中位年龄60岁；鳞癌26例，腺癌35例；ⅢB期29例，Ⅳ期32例；体力状况（PS）评分≤2分；治疗前肝肾功能、血常规及心电图均正常；预计生存时间≥3个月；有可测量的临床指标（CT、MIR等）。患者均接受培美曲塞联合奈达铂方案化疗4～6个周期，每2个周期评价疗效。

1.2化疗方案及所用试剂

培美曲塞：第1天给药，500 mg/m2，溶于100 ml生理盐水稀释后，静脉滴注10 min；奈达铂第2天给药，60 mg/m2，溶于500 ml生理盐水稀释后，静脉滴注，滴注时间>1 h，滴完后继续输液1000 ml；给化疗药之前常规给予5-HT3受体阻断剂阿扎司琼10 mg静脉滴注以镇吐，21 d为1个周期。治疗2个周期。主要试剂：鼠抗人ERCC1单克隆抗体，鼠抗人β-tubulin 3单克隆抗体，鼠抗人TOPOⅡ单克隆抗体，即用型免疫组织化学超敏SP试剂盒（KIT-9701）及DAB染色液（KIT-0017），均购自福建迈新生物技术有限公司。

1.3观察指标及评价标准

观察2周后参照实体瘤疗效评判标准进行疗效评价，具体如下。完全缓解（CR）：部病灶消失维持4周，无新病灶出现；部分缓解（PR）：缩小≥30%维持4周，无新病灶出现；疾病稳定（SD）：病灶既未缩小≥30%并维持4周也未增加≥20%或出现新病灶。

免疫组化染色：组织蜡块3 μm切片行免疫组化，ERCC1和TOPOⅡ均阳性表达于细胞核，β-tubulin 3阳性表达于细胞质，以出现棕黄色颗粒为阳性标志。结果判定：采用随机双盲法阅片，高倍视野下随机选取计数200个肿瘤细胞，观察阳性细胞百分比及阳性染色强度，然后进行评分。细胞计数评分标准：阳性细胞数<10%为0分，10%～25%为1分，>25%～75%为2分，>75%为3分。染色强度评分标准：着色部位不着色为0分，着色部位着色不全为1分，着色部位完全着色且淡染为2分，着色部位完全着色且深染为3分。两方面评分相加0～3分为低表达（-），4～6分为阳性表达（+）。

1.4统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理，各组间计数资料的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ在晚期NSCLC组织中的表达

在61例NSCLC中，ERCC1阳性表达25例（40.98%），β-tubulin 3阳性表达29例（47.54%），TOPOⅡ阳性表达22例（36.66%）。

2.2 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达与临床病理特征的关系

ERCC1、β-tubulin 3的表达与患者的年龄、性别、临床分期及组织学类型均无关（P>0.05），TOPOⅡ的表达与患者的年龄、性别、临床分期无关（P>0.05）。TOPOⅡ在腺癌中阳性表达8例（22.86%），在鳞癌中阳性表达14例（53.85%），在鳞癌中的表达高于腺癌，差异有统计学意义（P=0.017）（表1）。

2.3 ERCC1、β-tubulin 3及TOPOⅡ的表达与铂类化疗疗效的关系

ERCC1阳性表达患者化疗有效率为16.00%（4/25），非阳性表达患者化疗有效率为63.89%（23/36），差异有显著性（P=0.000）；β-tubulin 3阳性表达患者的化疗有效率为48.28%（14/29），非阳性表达患者的化疗有效率为40.63%（13/32），差异无统计学意义（P=0.611）；TOPOⅡ阳性表达患者的化疗有效率为63.64%（14/22），非阳性表达患者的化疗有效率为33.33%（13/39），差异有统计学意义（P=0.032）（表2）。

3讨论

随着全球经济的高速发展以及环境污染的日益加剧，再加上吸烟人群的不断增多，使得肺癌高居全球新增癌症之首，年死亡人数达100多万，且每年的增长率>25%。但目前肺癌的治疗和预后仍不能令人满意，这与其易发生、复发、转移以及化疗药物耐药有很大关系。随着对功能性基因组研究的深入，合理的个体化治疗成为一种新的趋势，2009年美国临床肿瘤学会年会中提出NSCLC治疗更应强调这一原则。铂类通过与肿瘤细胞形成铂-DNA聚合物，导致DNA复制障碍，从而抑制肿瘤细胞的分裂增殖，造成杀伤。铂类耐药的重要机制为核苷酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）能力增强，通过NER清除铂-DNA聚合物，导致铂类失效。

ERCC1位于染色体19q13-2，全长15 kb，含10个外显子，编码含297个氨基酸的蛋白质。ERCC1与DNA修复酶缺乏互补基因，形成异源二聚体，具有5′端DNA核酸内切酶活性，可识别并切除受损DNA5′端，使铂类损伤的DNA得到迅速修复，从而导致耐药的发生。ERCC1活性的高低可反映整个NER修复活性的水平[5]，低表达会促使肺癌的发生和复发，但对铂类药物敏感；阳性表达可减少肿瘤的复发，但易引起耐药的发生[6]。近年来ERCC1表达与铂类耐药之间的关系得到广泛验证，Reynolds等[7]对晚期NSCLC的三期实验进行回顾性研究，应用荧光定量免疫组化方法检测ERCC1蛋白的表达，发现其与铂类方案疗效呈负相关；Olaussen等[8]研究761例NSCLC患者ERCC1的表达水平，证实阴性表达患者的总生存期明显高于阳性表达患者，且前者应用含铂辅助化疗能够明显延长生存期。本研究结果显示，ERCC1表达阴性组的化療效果明显高于表达阳性组，差异有统计学意义，与目前多数文献的研究结果一致。Rybárová等[9]对107例NSCLC中的ERCC1蛋白表达进行相关性分析，认为ERCC1在NSCLC不同组织学类型表达差异无显著性，与本研究结果一致，因此检测ERCC1的表达有助于预测患者的预后及对铂类药物的化疗敏感性，对指导晚期NSCLC的个体化治疗方案能够提供一定的依据。

TOPOⅡ是机体内必不可少的核酶，直接参与DNA的转录、翻译、复制及染色体分离等过程，主要存在于SG2/M期[10-11]。TOPOⅡ的表达主要有两种作用：①可体现肿瘤细胞的增殖指数；②可作为肿瘤化疗药物作用的靶点，化疗药物通过与TOPOⅡ结合而使DNA复制和转录异常，阻碍肿瘤细胞的增殖。NSCLC肿瘤组织的TOPOⅡ表达水平可直接影响化疗药物的活性，TOPOⅡ表达水平越高，对化疗药物的敏感性就越高；反之，则导致肿瘤细胞的耐药[12-14]。本研究结果显示，TOPOⅡ蛋白表达与铂类化疗效果呈显著相关，且其表达程度与铂类化疗药物的疗效呈正相关，即阳性表达患者铂类化疗疗效好，阴性表达患者对铂类更易发生耐药，这与上述研究结果相吻合。

β-tubulin是微管结构的主要组成部分，而微管蛋白是细胞骨架的重要组成部分，在细胞有丝分裂中起重要作用，是紫杉醇类药物作用的靶点。其可分为7种亚型，其中β-tubulin 3的作用最为重要。文献报道，β-tubulin 3表达与紫杉醇类的化疗疗效具有相关性，而与铂类药物的耐药性是否相关尚不明确[15-19]。Huang等[20]的研究结果显示，NSCLC鳞癌患者的β-tubulin 3阳性率与腺癌患者比较，差异无统计学意义。本研究结果显示，β-tubulin3的表达与铂类药物疗效无相关性。

综上所述，ERCCI及TOPOⅡ可作为预测NSCLC对铂类化疗药物疗效的生物学标志物，对临床用药及预后有一定的指导意义；但β-tubulin 3与铂类疗效无明确相关性，需继续扩大样本量以进行更深入的研究。

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