血必净注射液对狼疮性肾炎血管内皮细胞的保护作用

[摘要] 目的 探讨血必净注射液对于狼疮性肾炎患者血管内皮细胞的保护作用。 方法 选择58例狼疮性肾炎患者。分为对照组（A组）和血必净组（B组），两组均给予激素、CTX及降压、调脂等对症处理（疗程14 d）。血必净组在上述治疗基础上加用血必净50 mL，加入0.9%NaCl溶液100 mL静滴，每日2次（疗程14 d）。对所有患者治疗前后测定血浆血栓调节蛋白（TM）及尿巨噬细胞特异性趋化蛋白-1（MCP-1）浓度，并与本院门诊健康查体者20例（正常组）比较。 结果 入院时TM、MCP-1水平在对照组[（20.4±12.1）ng/mL、（599.5±305.3）pg/mL）]及血必净组[（21.7±13.2） ng/mL、（605.2±317.2）pg/mL]均显著高于正常组[（4.7±1.25）ng/ml、（138.2±42.4）pg/mL]（均P < 0.01）。血必净组患者TM、MCP-1在治疗7 d [（12.6±8.4） ng/mL、（408.3±108.3）pg/mL]、14 d[（7.5±5.27）ng/mL、（312.4±121.2）pg/mL]，明显低于对照组[7 d时：（16.5±10.3）ng/mL、（489±167.4）pg/mL；14 d时：（10.4±4.1）ng/mL、（391.3±132.4）pg/mL）]（P < 0.05），仍高于正常组[7 d时：（4.4±2.1）ng/mL、（136.7±44.8）pg/mL；14 d时：（4.5±1.9）ng/mL、（139.6±43.1） pg/mL）（P < 0.05）。 结论 血必净注射液对狼疮性肾炎血管内皮具有一定的保护作用。

[关键词] 血必净注射液；内皮细胞；血栓调节蛋白；巨噬细胞特异性趋化蛋白-1

[中图分类号] R692.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（b）-0016-03

随着研究进展，临床越来越认识到狼疮性肾炎中肾血管病变的重要性，狼疮性肾炎中肾血管病变均提示预后不佳[1]，伴TMA型和NNV型血管病变的DPLN患者肾脏损害明显重于其他型[2]。血栓调节蛋白（thrombomodulin，TM）是存在于血管内皮细胞膜上的糖蛋白，在调节血管内凝血过程中起重要作用，已有研究证实血浆中可溶性血栓调节蛋白（soluble thrombomodulin，sTM）是血管内皮细胞受损的标志[3-4]；炎症反应是许多肾脏病的共同特征，炎症细胞向肾组织中浸润式肾脏病发生的主要环节，也是影响肾脏疾病进展的重要因素。炎症反应在狼疮性肾炎及其血管病变的发生发展中起着重要的作用。炎症细胞因子有巨噬细胞特异性趋化蛋白-1（MCP-1）MCP-1等趋化因子对不同白细胞亚群具有选择性趋化和活化功能，是启动SLE肾损伤的关键成分[5]。血必净是从36组中药处方中筛选而来， 具有抗细菌毒素、降低内毒素水平、调节免疫及炎性介质、改善微循环、保护血管内皮细胞的作用[6]。本实验通过观察血必净对LN患者中TM与MCP-1变化，探讨血必净在LN患者中肾脏保护机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

58例狼疮性肾炎均为2008～2011年本院住院患者。全部病例符合1982年美国风湿病学会制定和2003年我国风湿学会建议的SLE诊断标准。且具备以下条件：（1）B超双肾未缩小者，及肾纵长>9 cm者；（2）LN病程≤2年；（3）有SLE活动表现者；（4）肾功能无附加的可逆性因素存在，如梗塞性肾病、水电解质平衡失衡、肾毒性药物的使用。用Excel随机数生成器随机分为两组：对照组（28例）年龄17～43岁，平均（28.5±6.4）岁；病程1～24个月。血必净组（30例），年龄16～42岁，平均（27.3±6.7）岁；病程 1 ～24个月，两组年龄、性别等一般资料差异无统计学意义（P > 0.05）。正常组为本院门诊健康查体者20例，排除糖尿病、高血压及正在使用抗生素者等。

1.2 SLE疾病活动度判定

根据SLEDAI评分标准判断LN患者疾病活LN动情况。

1.3 治疗方法

对照组：予激素、CTX及降压、调脂等对症处理。治疗组：上述治疗基础上加用血必净50 mL，加入0.9%NaCl溶液100 mL静滴，每日2次，共14 d。

1.4 观察指标及检测方法

1.4.1 一般肾功能检查指标检测 尿液：24 h尿蛋白定量（采用双缩脲比色法，正常值<0.4/24 h）；血清学检查：肌酐（SCr）。

1.4.2 血浆sTM检测 所有患者均于肾活检当日抽取全血1.8 mL，与枸橼酸抗凝剂0.2 mL按1∶9比例混合抗凝，留取血浆，-70℃冻存待测。sTM的测定采用ELISA法，试剂盒购自法国DIACLONE公司，具体方法严格按说明书进行。每份标本均同时测定二次，取均值。

1.4.3 尿MCP-1 水平测定 留取随机尿液10 mL， 700 r/min 离心5 min， 取上清200 μL置- 70℃保存， 收齐后1 次采用ELISA方法检测MCP-1， 酶标仪为奥地利Anthos zenith 340 rt，试剂由Bender MedSystems GmbH公司提供，严格按说明书操作，试剂的最低检测值为2.3 pg/mL，样品值低于此值按0 pg/mL 计。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行数据分析。计量资料采用均数±标准差表示，组间差异比较采用独立样本t检验。P < 0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 24 h尿蛋白及血肌酐变化

对照组及血必净组14 d后，24 h尿蛋白及血肌酐都较治疗前有显著下降，且血必净组下降更显著（P < 0.05），见表1。

2.2 血清TM水平改变

对照组及血必净组血清TM水平较正常组显著升高（P < 0.05），治疗后7 d、14 d两组TM水平显著下降，血必净组下降更显著（P < 0.05），见表2。

2.3 尿MCP-1水平改变

治疗对照组及血必净组尿MCP-1水平较正常组有显著升高（P < 0.05），治疗后7 d、14 d两组MCP-1水平显著下降，血必净组下降更显著（P < 0.05），见表3。

2.4 血清TM水平与尿MCP-1水平关系

TM与MCP-1呈显著相关（r = 0.957，t = 28.455，P = 0.000 < 0.05），见图1。

3 讨论

肾组织纤维化开始于单核细胞的浸润，间质的浸润是几乎所有原发性和继发性间质病变的特征表现。单核细胞浸润标志着最初炎症的发生，同样也存在于继发性间质性炎症中。MCP-1等趋化因子对不同白细胞亚群具有选择性趋化和活化功能，是启动SLE肾损伤的关键成分[5]。狼疮肾炎患者中肾小管及血管壁中MCP-1的表达明显升高，肾组织中MCP-1过度表达可以促进单核细胞聚集导致小管间质损伤[7]。Rovin BH等[8]报道尿MCP-1水平是SLE活动的重要指标。IN患者中，炎症细胞浸润肾小球和肾间质，白细胞浸润程度和肾功能损害呈线性相关[9]。Alzawawy A等[10]研究表明，血清MCP-1在狼疮性肾炎的患者组中比正常对照组性升高，而没有肾损害的系统性红斑狼疮组与正常对照组比较无显著性差异。在活动性LN患者组中尿中MCP-1水平比没有肾损害的系统性红斑狼疮组与和正常对照组明显升高。尿MCP-1水平与尿蛋白呈正相关，与肌酐清除率及血红蛋白呈负相关。因此，尿中MCP-1水平与肾炎的严重程度密切相关[10]。血管内皮细胞损伤是血管病变的始动因素。在各种病理因素刺激下，内皮细胞会释放更多的细胞因子和炎症介质。内皮细胞也通过上调其表面粘附分子促进白细胞的附壁和粘附，刺激中性粒细胞释放更多的氧化剂、蛋白酶和花生四烯酸等代谢产物，加重组织损伤[11-12]。缺血性急性肾损伤后炎症反应具有重要作用。内皮细胞功能障碍始动的炎症反应使缺血的近端肾小官生成许多炎症介质。其中促炎症细胞因子有巨噬细胞特异性趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-8等[13]。血必净是从36组中药处方中筛选而来，主要有由红花、赤芍、川芎、丹参、当归等组成。长期大量的基础与临床研究表明，血必净具有活血化瘀、行气止痛、清热解毒、菌毒并治等功效。现代药理学研究表明，活血化瘀中药能改善微循环，增加血流量，减少血小板的黏附和聚集，抑制纤维母细胞合成胶原，使肥大细胞增多，降低急性炎症毛细血管的通透性，减少炎性渗出，改善局部血液循环，促进炎症吸收，并使炎症病灶局限化，抑制炎性肉芽肿形成，同时能增强网状内皮细胞的吞噬功能和吸附能力，使血肿和其他坏死组织易被吸收，从而促进病变的修复和治愈[14]。动物实验表明，血必净注射液可以脓毒血症大鼠血清炎症介质，减轻肾组织形态学损伤[15]。

本研究发现狼疮性肾炎活动期患者血浆TM浓度及尿MCP-1浓度较正常组明显升高，表明存在严重的血管内皮损伤及炎症反应。尿蛋白及血肌酐也明显升高，表明肾脏损伤严重。经治疗后，7 d及14 d血浆TM浓度及尿MCP-1浓度有下降趋势，尿蛋白及血肌酐也有下降趋势，且血必净组较对照组下降更加明显，提示血必净组内皮损伤恢复较好，且炎症反应减轻明显，肾功能好转明显。相关性分析表明血浆TM浓度及尿MCP-1浓度呈正相关性，表明血管内皮损伤与炎症密切相关。

本研究结果显示血必净通过减轻炎症反应保护血管内皮细胞，从而减少尿蛋白、降低血肌酐，改善狼疮性肾炎的肾损害。

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（收稿日期：2013-02-18 本文编辑：魏玉坡）

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