应用双试剂检测HBsAg在兵检中检测结果分析

在征兵体检中，我县已多年应用双试剂检测HbsAg，结果令人满意，大大地提高了征兵的质量，进一步杜绝了漏检、退兵地现象。选择两家合格厂家生产的HbsAg试剂，对同一标本在同等条件下，严格按试剂盒说明书进行操作。现将最近3年内我县适龄青年采用双试剂检测结果作浅显分析。

资料与方法

征兵体检抽血人数1059人。

试剂：上海荣盛生物技术有限公司；郑州安图绿科生物有限公司。

两家公司的产品均采用ELISA法进行HBsAg检测，严格按照试剂盒说明书操作。

实验步骤：①取出一定量的包被孔，编号。留一孔做空白对照、其余加入阴性对照三孔和阳性对照二孔50μl/孔及待测标本50μl/孔于相应的反应孔内。②除空白孔以外，各孔分别加入酶结合物50μl(或1滴/孔)。③在微型振荡器上振荡30秒使孔内液体混合均匀(该步骤非常重要)。④贴上板贴，置37℃下温育30分钟。⑤撕下板贴，洗板：甩去孔内液体，洗板6次，最后在吸水纸上拍干。⑥每孔加入底物液、显色剂各50μl(或1滴/孔)，37℃避光温育10分钟。⑦加终止液50μl/孔(或1滴/孔)。轻轻振荡混匀后，立即测试结果。⑧使用酶标仪测量：单波长测定，以空白孔调零，450nm测定各孔的OD值；直接采用450nm/(620～630nm)双波长测定各孔的OD值。

结 果

两家公司的产品均采用ELISA法进行HBsAg检测。

讨 论

对照表表明，如果单用上海荣盛生产的试剂盒，漏检率1.04%，如果单用郑州安图绿科生产的试剂盒，漏检率0.85%。

采用双试剂对同一样本进行检测，可使漏检率大大减低，从而大大提高了兵检的质量。

针对两组存在的差异，本文认为是由于试剂本身存在包被抗原的组成、长短、合成方式等方面的不同及使用单克匹配位点的不同，或试剂盒的生产工艺、保存、运输等环节的差异也会影响其质量，加之不同地区、人群的流行感染株的差异及感染者体内抗体模式的多样化及标本自身因素存在干扰因子(内源性物质和外源性物质)等因素的影响，另外试剂采用的方法学本身差异、操作因素的影响等等，有时就会出现极个别的标本在不同的试剂间有不同的结果；甚至同一标本在不同时间检测结果亦不一致的情况。

检测抗原时，病毒基因突变造成不同突变体之间存在着抗原性的差异出现结果不一。有研究结果表明［1］，在新加坡，乙肝病毒由于氨基酸145位置上Gly替待Arg是一种经常的病毒突变，尽管母亲为HBsAg和HBeAg阳性时出生的新生儿进行了多克隆乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗的注射，但仍会感染乙肝病毒。HBV突变病毒基于改变膜蛋白的抗原簇显示HBV不为先前认为的抗原单一性，并且抗体逃避性变异能在体内发生，所以这种逃避性变异可能不为现有单克隆试剂检测。因此，用不同的HBsAg酶联免疫(EIA)试剂检测同一血清，其结果有可能截然不同，当然这样的情况出现的几率很低。目前此种情况很难避免，因为这些鉴别确认实验只能在部分实验室开展检测，而且费用较高不易普及。

检测试剂方法学本身不同造成灵敏度、特异性不同的出现。有报道［2］，用MEIA法有效检测低水平HBsAg(ELISA检测阴性标本)研究中ELISA检测HBsAg约有1.58%大的假阴性率，并且对于ELISA显色较弱者存在一定假阳性(可能与污染等因素有关)ELISA检测血清HbsAg浓度在5ng/ml以下的弱阳性者约有2.92%的假阳性率。

包被抗原的组成、时间长短、合成方式等方面的不同造成结果不同。

标本自身因素存在干扰因子，内源性物质和外源性物质也在一定程度上干扰检测结果。Boscato等(1986)指出，大约40%的人血清标本种含有非特异性干扰物质影响到检测结果。如：溶血标本对非特异性因素的结果也有影响［3］。溶血严重程度对非特异性反应的影响明显，溶血越严重引起假阳性反应越强烈。另外，离心方式和放置时间对非特异性反应也有影响［4］，离心转速越高、时间越长、离心越彻底，消除非特异性反应的效果越好，假阳性率越低。反之，假阳性反应越明显。

操作因素的影响造成结果前后不一［5］。ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体检测。但ELISA测定影响因素较多。而且操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果(即假阴性或假阳性结果)是由操作不当造成的，这应该引起重视。

参考文献

1 酶联免疫测定的干扰因素和对策.

2 酶免法检测HbsAg假阳性原因分析.

3 蒋艺勤.酶免法检测HbsAg假阳性原因分析［J］.四川生理科学杂志,2006,28(4):181-182.

4 王卉,任健民.酶免法检测HbsAg假阳性原因探讨［J］.实用医技杂志,2002,9(1):15-16.

5 加样时间对ELISA快速一步法检测乙型肝炎标志物的影响.

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