不同洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞的检测结果分析
【摘要】 目的 通过用两种洗涤溶液制备冰冻解冻去甘油红细胞结果进行质量分析， 来比较应用不同洗涤溶液， 一类是9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠注射液、0.9%氯化钠；一类是9%氯化钠、0.9%氯化钠分别进行解冻红细胞洗涤， 选择合适制备冰冻解冻去甘油红细胞的洗涤方法。方法 随机抽取2010年采血6 d之内新鲜全血32份， 通过手工制备冰冻红细胞：6 d之内（2～6℃保存）新鲜全血经过25 min， 2300转， 离心后去除血浆， 将血液倒入三珠空袋内， 用无菌接驳机连接输血器， 应用甘油160 ml， 25 min加入振荡器60次/min， 室温沉淀30 min后放入-80℃冰箱速冻， 1个月后进行解冻。随机分为A、B两组， 每组16袋， 应用ACP215血液处理仪进行解冻红细胞。A组洗涤液包括9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠这三种溶液；B组洗涤液包括9%氯化钠、0.9%氯化钠这两种溶液。用两种不同洗涤溶液进行冰冻解冻去甘油红细胞洗涤， 通过检测项目为红细胞回收率%， 白细胞残留率%， 血小板残留率%， 甘油含量， 血浆游离血红蛋白含量， 体外溶血等指标进行检测分析。结果 A组解冻红细胞：红细胞回收率81.0%±2.6%， 白细胞残留率0.67%±0.14%， 血小板残留率0.00%， 甘油含量4.8±0.43 g/L， 血浆游离血红蛋白含量0.62±0.11 g/L， 体外溶血13%±5%。B组解冻红细胞：红细胞回收率82.0%±2.3%， 白细胞残留率0.61%±0.26%， 血小板残留率0.42%±0.1%， 甘油含量（5.1±0.13）g/L， 血浆游离血红蛋白含量（0.53±0.12） g/L， 体外溶血12%±4%。两组结果均符合国家标准， 且无统计学意义。结论 通过手工制备冰冻红细胞后， 应用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞分别使用A、B两种洗涤液， 根据统计学分析洗涤效果无统计学意义， 检测结果均达到国家标准， 可以确定在洗涤中不加入羟乙基淀粉130氯化钠注射液， 检测结果也能达到国家标准。
【关键词】 冰冻解冻去甘油红细胞；洗涤液；羟乙基淀粉；130氯化钠注射液
冰冻红细胞在国内外已普遍在临床应用， 超低温甘油化冰冻保存红细胞， 可大幅度延长红细胞在体外存活时间， 平时贮备， 一旦临床需要可立即进行解冻洗涤。在制备冰冻解冻去甘油红细胞必须用一定的洗涤和程序， 去除高浓度甘油， 使高渗状态下的红细胞， 通过洗涤过渡到生理等渗状态红细胞悬液， 并去除了绝大部分白细胞、血小板、血浆蛋白， 减少了输血副反应， 是临床患者理想、安全、可靠的成分制品。2010年以前长春市中心血站使用ACP215血液处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞应用9%氯化钠， 羟乙基淀粉130氯化钠注射液， 0.9%氯化钠洗涤液进行血液洗涤；2010年5月以来进行A、B两种洗涤液洗涤试验， 为评价这2种洗涤液洗涤的冰冻解冻去甘油红细胞质量状况， 经检测得出2种洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞中各项指标并计算， 并比较2种洗涤液洗涤的冰冻解冻去甘油红细胞合格率， 来确认羟乙基淀粉130氯化钠注射液撤出对洗涤效果的影响。
1 材料与方法
1. 1 仪器设备 ACP215血液处理仪（ACP215型、美国Haemonetics公司）贺利氏（6000型、德国）电热恒温水浴箱（HHW21-600型、天津）， 无菌接驳机（SC-201型、日本）， 血细胞计数仪（KX-21型、日本）， 半自动生化分析仪（MF-6.24型、德国）调速多用振荡器（HY-4型、金坛市）-80℃速冻冰箱（MDF-U32V型、日本）。
1. 2 试剂与材料 复方甘油试剂（北京博德桑特、080915）三珠袋（北京博德桑特、080904）ACP215红细胞洗涤耗材（美国血技、G09120）9%氯化钠（北京博德桑特、091221）羟乙基淀粉130氯化钠注射液（山东长富、10020183）0.9%氯化钠（山东威高、0809081）输血器（江西洪达、080903）钨酸钠（天津化学试剂四厂、20090316）氢氧化钠（天津博迪化工、20100307）乙二醇（天津富宇精细化工、090919）无水乙醇（沈阳华东试剂厂、20100307）稀释液（希森美康医用电子有限公司、G9142）酚酞（沈阳华东试剂厂、20091112）高碘酸钠（天津福晨化学试剂厂、20080620）血浆游离血红蛋白试剂盒（北京瑞尔达生物科技、C1005016）溶血剂（希森美康医用电子有限公司、R9059）
1. 3 冰冻红细胞制备 取32袋距采用日期6 d之内新鲜全血200ml/袋， 用贺利氏6000， 2200转25 min离心， 用分浆夹去除上层血浆， 采用人工手法， 把浓缩红细胞用无菌接驳机接驳并转移到三珠袋， 用调速多用振荡器和输血器加入160ml复方甘油溶液， 室温静止30 min后， 装盒， 送入-80℃冰箱速冻。
1. 4 冰冻解冻去甘油红细胞制备 将保存30 d的冰冻红细胞32袋随机分为两组， A组用洗涤液为9%氯化钠注射液、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠；B组用洗涤液为9%氯化钠、0.9%氯化钠。在37℃电热恒温水浴箱内4-6 min， 使冰冻红细胞融解， 确认无渗漏后， 用ACP215血液处理仪、无菌接驳机接驳进行洗涤， 使用去甘油化洗涤程序进行解冻洗涤。
1. 5 检测项目数据 分别计算两组红细胞回收率（%）， 白细胞残留率（%）， 血小板残留率（%）， 甘油含量， 血浆游离血红蛋白含量， 体外溶血等指标。
1. 6 质量标准 红细胞回收率≥80%， 白细胞残留率≤1%， 血小板残留率≤1%， 甘油含量<10g/L， 血浆游离血红蛋白含量≤1g/L， 体外溶血≤50%
1. 7 统计学方法 采用SPSS11软件进行检查
2 结果
两组洗涤液， A组（9%氯化钠溶液， 羟乙基淀粉130氯化钠注射液， 0.9%氯化钠溶液）、B组（9%氯化钠溶液， 0.9%氯化钠溶液）制备冰冻解冻去甘油红细胞， 检测数据及比较， 两组检测数据之间均无统计学意义（P>0.05）
3 讨论
冰冻红细胞制备基本有两种方法：高浓度甘油保存法和低浓度甘油保存法。高浓度甘油保存法：终浓度为40%， 储存在-65℃或-65℃以下冰箱中；中浓度甘油保存法：终浓度为20%， 储存在-120℃以下液氧中；低浓度甘油保存法：终浓度14%， 采用快速冷冻， 储存在-150℃液氧气箱或液氧中。制备冰冻解冻去甘油红细胞方法可分为慢速糖液聚集洗涤制备法， 由美国人哈斯（Huggins）发明， 加等体积的50%葡萄糖和10%蔗糖与0.9%氯化钠溶液， 先用高渗逐渐过度到等渗， 洗涤液为9%氯化钠、0.9%氯化钠组合， 目前我国一般采用9%氯化钠、羟乙基淀粉130氯化钠、0.9%氯化钠组合进行冰冻解冻红细胞洗涤， 但是本站发生6例在洗涤过程中发生机器堵塞现象， 既影响机器使用寿命， 又延误制备时间。用ACP215血液处理仪洗涤冰冻红细胞时， 在洗涤液中不添加羟乙基淀粉130氯化钠制备冰冻解冻去甘油红细胞各项检测指标均达到国家标准， 与添加羟乙基淀粉130氯化钠的洗涤液制备冰冻解冻去甘油红细胞检测结果无显著差异。这样既可节约有耗材成本， 又能方便快捷， 为抢救患者生命争取了宝贵时间， 值得推广应用。
参考文献
[1]王培华. 输血技术学.北京：人民卫生出版社， 2002.
[2]邱艳. 全血成分务质量要求与血液标准华. 北京：中国标准出版社， 2003.
[3]中华人民共和国国家标准 全血成分血质量要求GB18469-2001.
[4]袁连根、李延成、张志勇 . 冰冻红细胞解冻条件的改进. 中国生物制品学杂志， 2007，20（11）：861-862.
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