农药对克氏原螯虾消化酶活性的影响

材料与方法

试验螯虾与试验设计

选取活泼健壮的螯虾个体作为实验材料，体重约20g重量差为0.2g。选用37个1m2的水泥池分为12个试验组别，每组3个水泥池，另外一个水池作为对照组，水深约10㎝，模拟稻田养殖环境，每池放入一定量小浮萍，水花生，水池角落放入适量泥土，每池放入虾15～20只，试验10天，依次向试验组⑴～⑿水池投入阿维菌素（杀虫剂）、稻散·毒死蜱（杀虫剂）、噻嗉酮异丙威（杀虫剂）、苄·丁(除草剂)、苄·乙 (除草剂)、氯吡·甲磺隆(除草剂)、甲霜·恶毒灵(杀菌剂)、使百克(杀菌剂)、井冈·烯唑醇 (杀菌剂)、庄丰(生长剂)、甲天下卫士(生长剂)、天丰素(生长剂)。

试验农药用量

苄乙施用浓度为：0.05g/m2，苄丁施用浓度为：0.15g/ m2，氯吡·甲磺隆的施用浓度为： 20.03ml/ m2，井冈-稀唑醇施用浓度为：0.1507g/ m2 ，使百克施用浓度为：0.1530g/ m2，甲霜-噁霉灵施用浓度为：0.9990 g/ m2 ，庄丰施用浓度为：0.4620g/ m2， 甲天下卫士的施用浓度为：0.2738g/m2，天丰素的施用浓度为：0.6522g/ m2，阿维菌素的施用浓度为：0.0210ml/ m2，稻散·毒死蜱的施用浓度为：0.5ml/ m2， 噻嗉酮异丙威的施用浓度为：0.05g/ m2。

样品制备

每池取三只螯虾，在冰盘中活体解剖 ，剔除附着物，然后剖开， 取出全部肝胰脏、胃和肠道，用生理盐水清洗胃和肠道内容物，滤纸吸干表面水分后分别称重。将肝胰脏、胃和肠道样本称重，然后剪碎，加入5倍体积(w/v)的预冷双蒸水(4℃)，低温条件下使用玻璃匀浆器制成匀浆后，匀浆液用高速冷冻离心机4500r/min ，4℃离心15 min；取上清液(即粗酶液)，用于测定蛋白酶、淀粉酶活力 (4℃保存， 24h内测定完毕，或短期保存于-18℃低温冰箱)。

消化酶测定

测定持续10d。隔天测一次，每次每池随机取3只虾。取虾时间上午10点。

蛋白酶活力测定:采用酪蛋白为底物的福林—酚试剂显色法。蛋白酶活性定义为:在一定的pH和温度下，每min水解酪蛋白产生1€%eg酪氨酸为1个酶活力单位(€%eg/min)。

淀粉酶活力测定：采用淀粉—碘法，淀粉酶活性定义为：在37℃、30min和100mL酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg时为一个淀粉酶活力单位(€%eg/min)。

结果与分析

农药对克氏原螯虾毒性的影响

由于几个杀虫剂大多有软壳现象，所以杀虫剂应该会造成虾软壳。2号池稻散·毒死蜱和8号池 使百克经解剖发现肝脏变为淡绿色或褐色，是由于农药的施用对其造成了毒性影响。。施药当天偶尔下小雨，第2天多云，第3天小雨，后都是晴天，对消化酶活性有一定影像。

农药的持续时间对克氏原螯虾消化酶活性的影响

克氏原螯虾施用十二种农药后，可以看出苄乙对蛋白酶的影响是相当大的并且残留时间相对较长，且对蛋白酶是有抑制作用，效果比较稳定；氯吡·甲磺隆对淀粉酶的影响比较大，在药物施用后很快的会抑制淀粉霉的活性，残留时间较长；噻嗪酮对蛋白霉的活性影响非常大，下药后蛋白活性马上升高超常，达到60ug/min€?05之后又在3天内骤然下降到21ug/min€?05，这个过程可能会造成虾大量死亡；井冈-稀唑醇在4天内会使蛋白酶上升到一个最高点然后有会在2天内急剧下降到标准活性，这6天中可能会造成虾大量死亡；使百克施用后会使蛋白酶降低到10ug/min€?05随后有个缓慢上升下降的过程总体上对虾的影响不大；甲霜-噁霉灵药物使用后蛋白酶活性会急剧上升到一个至高点有会在4天内下降到标准活性，后期比较平稳。井冈-稀唑醇会导致淀粉酶很不稳定并在第6天会使淀粉酶降低到300um/min，而且这个低谷会持续4天以上，对虾的生长影响较大；使百克前期变化不明显到第6天后蛋白酶活性才会有逐渐下降反应，这一期间虾有充分的适应时间；甲霜-噁霉灵对虾淀粉酶的响相当大，施用药物后马上会是淀粉酶活性上升到800ug/min，随后4天内有降低到300ug/min，之后抑制在300ug/min-500ug/min起伏，影响虾的生长，严重时会造成大量死亡。庄丰对蛋白酶的影响是最大的但是其上升下降时间相对较长，虾有充分的适应时间，不会造成大量死亡现象；另两种药物波动幅度不大，且缓冲时间长，对虾的影响不大。滴滴神与庄丰对虾淀粉酶的影响相当大，施药后就会使淀粉酶活性降低到200um/min左右，其后两天内又急剧上升到700um/min，应急反应可能会造成虾大量死亡；田丰素基本无影响。

讨论

从实验结果来看，杀虫剂与其他农药差异显著，毒性较大，对生长剂较敏感，但影响不大，说明其毒性较小，而有些农药一般在3d才开始急剧下降或上升，故克氏原鳌虾对其具有一定的耐受性。其呈现不同的规律，表明农药在克氏原鳌虾体内的分布、激活和解毒等过程比较复杂，同一种虾对于不同农药的敏感性各不相同，不同农药的持续时间对消化酶的活性的影响也各不相同。最后结果：不同虾由于生理条件不同，对同一种农药的敏感性各不相同，同一种农药对不同虾和同种虾的不同发育阶段的毒性也布相一致。因此，在稻田养虾里对水稻用药防治病虫要严格掌握药物品种、浓度和使用方法， 才能增加养虾产量。

（作者单位：长江大学动物科学学院）

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