超高压液相色谱—串联质谱测定动物源性食品中磺胺甲基嘧啶药物残留

摘要：改进了动物源性食品中磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine SMR）、磺胺二甲基嘧啶（Sulfadimidine SDM）药物残留的超高压液相色谱-串联质谱检测方法。采用外标法定量，样品用40 mL乙腈分2次提取，于45 ℃下旋转蒸发至干，再用2 mL 10%甲醇水溶解残渣，10 mL正己烷脱脂，取下层溶液测定。此方法中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的线性范围为0.5～100 ng/mL，相关系数为0.999 5和0.999 8，磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的检出限均为0.5 μg/kg。该方法具有前处理过程简单、操作步骤少、目标物损失少等优点，可用于大多数实验室进行大量样品的检测。

关键词：动物源性食品；磺胺甲基嘧啶；磺胺二甲基嘧啶；超高压液相色谱-串联质谱法

中图分类号：S859.84 文献标志码：A doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.08.014

Determination of Sulfamerazine in Animal Food by Ultra High Pressure Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

WU Kun，LI Yuan

（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection，Xi"an，Shaanxi 710048，China）

Abstract：This paper improves the detection method of Sulfamerazine（SMR）and Sulfadimidine（SDM）in animal food by ultra high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The sample is extracted twice with 40 mL of acetonitrile，evaporated to dryness at 45 ℃，and then the residue is dissolved in 2 mL of 10% methanol and 10 mL of n-hexane is degreased. Results show that the linear range of sulfamerazine and sulfadimidine is 0.5～100 ng/mL，the correlation coefficient is 0.999 5 and 0.999 8，the detection limit of sulfamerazine and sulfadimidine is 0.5 μg/kg. The method has the advantages of simple preprocessing process，less operation steps and less loss of target，and can be used for the detection of a large number of samples in most laboratories.

Key words：animal-derived food；sulfamerazine；sulfadimidine；ultra high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry

磺胺類药物（Sulfonamides，SAS）是对氨基苯磺酰胺结构一类药物的总称，主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。由于SAS在生物体内的作用时间和代谢时间较长，蓄积浓度超过一定值会对人体健康造成危害，导致很多细菌对SAS产生抗药性。因此，许多国家都对SAS的使用限量进行了规定[1]。磺胺甲基嘧啶（SMR）和磺胺二甲基嘧啶（SDM）被普遍用于畜禽的疾病预防和治疗中，也是比较容易购买的有证质控标准样品[2]。参考GB/T 20759—2006[3]、GB/T 21316—2008及农业部1025号公告-23—2008[4]，对动物源性食品中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶药物残留的检测方法进行改进，前处理简单、灵敏度高，可用于实验室大批量样品中磺胺类药物残留的准确定量。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

鸡肉样品。

磺胺甲基嘧啶与磺胺二甲基嘧啶标准品（纯度>96%），德国Dr. Ehrenstorfer公司提供。所有有机试剂均为色谱纯，化学药品均为分析纯，实验室用水均来自优普纯水系统。

标准储备溶液的配制：准确称取SMR与SDM标准品，用甲醇溶解并稀释成100 μg/mL的标准储备溶液，于-18 ℃下避光可稳定6个月。混合标准储备溶液（1.0 μg/mL）的配制：分别吸取一定量的标准储备溶液，用甲醇稀释，-18 ℃下避光可稳定1个月。混合标准工作液的配制：临用前准确吸取一定量的混合标准储备溶液，用10%甲醇-水溶液稀释配制成适当质量浓度的混合标准工作液。

1.2 仪器与设备

Waters Xevo TQD型超高压液相色谱-串联质谱仪，美国Waters公司产品；漩涡混匀器，海门市其林贝尔仪器制造有限公司产品；KQ-500E型超纯波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品；TGL-16C型高速离心机，上海安亭科学仪器厂产品；RE-52A型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂产品；天平，分度值为0.001 g 和0.1 mg，赛多利斯科学仪器有限公司产品。

1.3 样品处理

称取匀浆后的鸡肉样品4.00±0.1 g于50 mL离心管中，加入5 g无水硫酸钠与样品充分混合，加入20 mL乙腈均质提取10 min，以转速6 000 r/min离心5 min，上清液转移至100 mL鸡心瓶中；用20 mL乙腈重复提取1次，合并上清液；上清液经45 ℃旋转蒸发至干，准确加入2.0 mL 10%甲醇-水溶液，超声振荡1 min；再加入10 mL正己烷振荡1 min，取1 mL下层溶液于2 mL离心管中，以转速12 000 r/min离心3 min；取下层样液经0.22 μm有机滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

1.4 液相色谱-串联质谱条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18型（1.7 μm，2.1 mm×50 mm）；流动相：甲醇和0.1%甲酸-水；流速0.2 mL/min；进样量10 μL；柱温40 ℃；样品室温度15 ℃。

色谱分离梯度洗脱程序见表1。

1.4.2 质谱条件

电离方式：ESI+；电离电压3.50 kV；离子源温度150 ℃；扫描方式：多反应监测，利用保留时间和碎片信号比值判断定性结果。

磺胺甲基嘧啶及磺胺二甲基嘧啶的质谱参数见表2。

2 结果与分析

2.1 样品前处理

方法前处理简单，但必须注意以下事项：

（1）提取过程中，让无水硫酸钠与样品充分混匀，再加入提取液，防止乙腈与样品中水分结合，样品失水结块，降低提取效率。

（2）浓缩过程应避光和严格控制温度，避免因过快浓缩而降低回收率。

（3）浓缩后溶解残渣时，确保溶剂的量能够完全溶解鸡心瓶中的药物残留。

（4）因方法用外标法定量，一定要同时进行试剂空白试验，对应基质空白及加标试验。

2.2 标准曲线的绘制

按照1.1所述方法，取适量的混合标准储备溶液，用10%甲醇-水溶液分别稀释至质量浓度为 0.5，1.0，5.0，10.0，50.0，100.0 ng/mL的系列工作液，进样量均为10 μL，外标法定量。

回归方程及相关系数见表3。

X表示待测物的质量浓度（ng/mL），Y表示质谱响应值，可以看出SMR和SDM在上述线性范围内，质谱响应值和待测物质量浓度呈良好的线性关系。

2.3 被测物的标准溶液离子色谱图

液相色谱-串联质谱条件，按1.4.1和1.4.2设置。

磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的标准溶液离子色谱见图1。

2.4 方法灵敏度试验

采用向阴性鸡肉样品中添加标准物质的方法，考查灵敏度。在本方法规定的取样条件下，定容体积为2.00 mL，按照3倍信噪比计，SMR与SDM在动物性源食品中的檢测限（LOD）均为0.5 μg/kg，

样品加标水平及回收率见表4。

2.5 质控标准样品验证

用此方法对购买的质控样品进行检测，检测结果在允许误差范围内，符合要求，验证通过。

参考文献：

孙伟红，刘欢，邢丽红，等. 水产品兽药残留检测技术标准解析及能力验证工作探讨[J]. 中国渔业质量与标准，2017，7（2）：11-18.

宋国强，施敏芳，李可芳，等. 用有证标准样品进行能力验证的方法探讨[J]. 环境科学与技术，2004，27（6）：42-44.

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会. GB/T 20759—2006畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法[S]. 北京：中国标准出版社，2006.

中华人民共和国农业部，农业部1025 号公告—23—2008.动物源食品中磺胺类药物残留检测液相色谱-串联质谱法[S]. 北京：中国标准出版社，2008. ◇

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