FAK在胃肠道间质瘤组织中的表达及其与诊断治疗关系的研究
对照。染色结束后，用苏木素进行复染，以使颜色更加鲜艳。
1.3 Western-Bolt采用10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用兔源抗FAK一抗（ abcam 40794），再用HRP标记的抗兔的二抗（WB150614）与一抗结合，在凝胶成像系统中成像。
1.4结果判读标准 免疫组织化学染色评分系统采用德国半量[8]评分：在光学显微镜下在200×及400×下观察切片面积及阳性染色强度。显微镜下观察到胞浆和（或）胞核呈棕色或黄色判定为阳性着色，阳性细胞数比率<10%记0分，1分为10%～25%，2分为25%～50%，3分为50%～75%，4分为>75%，与阴性对照比较着色强度分四级：0、1、2、3分，无染色为阴性 （0分），细胞浆和（或）细胞核呈淡棕色为弱阳性 （1分），呈棕色者为阳性（2分），深棕色为强阳性 （3分），然后根据阳性细胞数比率和染色强度得分的乘积将组织染色结果进行评分分级：0～1为阴性（-），2～4为弱阳性（+），5～8为阳性（++），9～12为强阳性（+++）。
1.5统计方法 使用SPSS 20.0（IBM）统计软件进行统计学分析，所有统计的资料均采用双侧检验，P值<0.05将认为所检验的数据差异有统计学意义。实验数据包括计数资料和计量资料。免疫组化检测FAK表达情况的实验总所获得的计数资料采用卡方检验比较二者之间构成比的差异。
2 结果
2.1免疫组化结果
2.1.1 不同侵袭危险程度组FAK的表达水平 胃肠间质瘤组织中存在FAK的表达，定位于间质的细胞浆，不同侵袭危险程度组FAK表达水平不同，见图1，统计学分析组间差异有统计学意义（χ2=19.827，P<0.01）。
图1 不同侵袭危险程度组FAK免疫组化染色图片，A为高危险度GIST，B为中危险度GIST，C为低危险度GIST，D为极低危险度GIST
2.1.2 胃肠间质瘤组织中FAK的表达与胃肠间质瘤患者性别和年龄的关系 将FAK的表达水平与胃肠间质瘤患者的性别和年龄分组进行比较，年龄（χ2=0.131，P>0.05），性别（χ2=0.162，P>0.05），差异均无统计学意义，见表2。
2.1.3胃肠间质瘤组织中FAK的表达量与胃肠间质瘤相关临床病理参数的关系 使用统计学的方法分析胃肠间质瘤的肿瘤部位、侵袭危险程度和细胞类型与FAK表达水平的关系，统计结果显示：FAK的表达量在不同级别的胃肠间质瘤中（P=0.08）、肿瘤部位（P=0.664）和细胞类型（P=0.093）的差异无统计学意义（P>0.05），见表3。
由于在侵袭危险程度中我们采用了不同级别的分类方法，并且其表达差异的P值非常接近0.05，所以我们对不同级别的胃肠间质瘤按照AJCC的胃肠间质瘤划分方法进行进一步的细分，得到以下评分等级资料，其P值等于0.016，小于0.05，差异具有统计学意义。其表达情况统计结果如图2。
图2 不同侵袭危险程度GIST中FAK表达情况统计图，在GIST组织中FAK随着侵袭危险程度的升高而表达上升，表达差异用χ2检验，（P<0.05用*表示）。
2.2 Western-Bolt结果 胃肠间质瘤新鲜组织提取总蛋白行Western-Bolt检测FAK的表达水平，结果显示：在正常组织和肿瘤组织中，FAK在胃肠间质瘤组织中的表达量显著增加，结果见图3。
3 讨论
黏着斑激酶（focal adhesion kinase， FAK）是一个分子量为125kD的胞浆酪氨酸激酶，在正常组织中，FAK主要对细胞的锚着依赖（anchorage dependent）性生长起调控作用，在侵袭性和转移性的肿瘤中，FAK表达较高水平，且在肿瘤进展过程中起关键性作用。免疫组化和Western-Bolt的实验结果中我们发现：胃肠间质瘤组织中存在FAK高表达，侵袭危险程度不同，FAK的表达水平不同，随着胃肠间质瘤侵袭危险程度的增高，FAK的表达量增多，呈现逐步递增的趋势。
比较FAK的表达量与胃肠间质瘤患者侵袭危险程度分期的关系，我们发现FAK的表达水平与胃肠间质瘤组织侵袭危险程度分期有关，不同的侵袭危险程度分期组，FAK的表达水平不同。实验结果显示：极低侵袭危险程度期和中侵袭危险程度期，极低侵袭危险程度期和极高侵袭危险程度期之间的差异均具有统计学意义（P<0.05），我们认为随着肿瘤分期的进展，FAK的表达量增多，表明FAK的表达水平与胃肠间质瘤临床进展有关，推测FAK可作为胃肠间质瘤患者临床进展的监测指标，并对胃肠间质瘤患者的预后有一定的参考价值。
FAK与性别的相关性分析中，结果是男性组和女性组之间的差异无统计学意义（P>0.05），因此推断性别与FAK表达水平的相关性不大。FAK与胃肠间质瘤的肿瘤部位及细胞类型的分析结果显示肿瘤部位及细胞类型差异无统计学意义（P>0.05），推测肿瘤部位及细胞类型对胃肠间质瘤中FAK表达无显著影响。研究表明，FAK的高表达与患者的预后不良有显著关系。
综合上述研究结果，我们认为FAK的表达量与胃肠间质瘤的临床进展相关。故此，我们提出FAK诊断GIST的新方法，即活检标本进行FAK基因诊断和FAK免疫组化诊断结合的方法。我们的研究在组织学上为FAK作为GIST的潜在治疗靶标也提供了可靠的依据。
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编辑/金昊天