小鼠沙蚕毒素类杀虫剂中毒不同洗胃方法的生存分析
材料与方法
1.1 实验对象
实验用小鼠体重15～20 g，由广西医科大学医学实验动物中心提供，实验小鼠的饲养、观察、胃管注入均由中心协助完成。
1.2 实验材料
沙蚕毒素类杀虫剂90%杀虫单可湿性粉剂，安徽华星厂出产，规格为每袋30 g，南宁市科园大道农业科技市场售，产品标准证GB 28153-2011，生产许可XK 13-000-00126，农药登记PD 20040816;0.9%生理盐水、2%碳酸氢钠盐水、注射用水均为广西医科大学第三附属医院急诊科备用药品;食用菜籽油自备。
1.3 实验方法
第一步，参照雌小鼠急性经口LD50：86 mg/kg，雄小鼠急性经口LD50：83 mg/kg，用注射用水稀释沙蚕毒素类杀虫剂杀虫单配成100 mg/ml浓度，将预实验小鼠按1 g体重胃管注入
0.1 ml，发现该农药对小鼠的最低全数致死剂量470 mg/kg。第二步，按最低全数致死剂量，均按1 ml含有4.70 mg沙蚕毒素类杀虫剂杀虫单加入三组洗胃液（生理盐水组、碳酸氢钠液组、食用菜籽油组）中，组成洗胃液+农药混合液。第三步，每组小鼠30只（雌15只，雄15只）按0.1 ml/g注入混合液。第四步，观察三组小鼠灌胃后死亡时间，观察小鼠中毒后的表现。
1.4 统计学处理
采用SPSS 22.0统计软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，采用t或F检验，Kaplan-Meier法对小鼠的生存资料进行统计学分析，并绘制生存函数图。计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同组别洗胃液灌胃后小鼠的生存状态观察
3组小鼠均观察到中毒表现：神志方面出现躁动、震颤、肌肉抽搐，继而活动减少，呼吸方面出现呼吸急促、发绀，96.7%（87/90）小鼠实验结束时死亡，仅有3.3%（3/90）小鼠在实验结束时尚未死亡（生理盐水组1例，食用菜籽油2例），做删失处理。
2.2 不同洗胃混合液的实验效果比较
经方差分析发现，不同洗胃方法小鼠生存时间差异有统计学意义（F=254.509，P<0.001）。三组不同洗胃混合液的生存时间两两比较分析发现，差异均有统计学意义（P<0.001），碳酸氢钠组生存时间最短，为（10.20±4.358）h，食用菜籽油组生存时间最长，为（36.87±5.794）h，生理盐水组的生存时间介入以上两组之间，为（24.37±2.977）h，见表1。
2.3 不同洗胃方法的小鼠生存曲线图
碳酸氢钠组下降最快，而食用菜籽油组下降速度最慢，生理盐水组居中，见图1。推测使用食用菜籽油洗胃或导泻，对沙蚕毒素类杀虫剂杀虫单中毒抢救效果可能更好，延长生存时间，得到更多机会救治。
3 讨论
3.1 中毒机制
本实验用的沙蚕毒素类杀虫剂（杀虫单）的中毒机理分析如下，临床上见到的沙蚕毒素类中毒患者，绝大部分为经口途径的误服所导致，此类杀虫剂毒物在水中很容易溶解，而当它遇到强酸或者强碱，能迅速水解转化为沙蚕毒素，所以，胃部成了最主要的转化部位，由此进入体循环，血脑屏障并不能有效屏蔽沙蚕毒素，对中枢系统有直接的毒害作用，沙蚕毒素为一种较弱的胆碱酯酶的抑制剂，竞争性阻断了神经节的胆碱能突触间神经传递，大剂量的沙蚕毒素如果直接作用到中枢神经，即可造成呼吸肌麻痹或严重心律失常[4]。另外，沙蚕毒素可以通过硫醇基团与受体的巯基形成二硫键来竞争受体，通过二硫键形式，影响了体内许多的巯基酶，这些被影响的巯基酶常常具有重要功能，例如，在线粒体中，呼吸链复合体的酶蛋白部分，就是巯基酶，因此沙蚕毒素中毒引起呼吸困难症状，根本原因为线粒体呼吸链复合体的酶蛋白活力受到毒物的抑制所致[4]。沙蚕毒素经过体循环最后才经尿液排出体外。因为胃部是毒物转化的主要部位，所以筛选出最适宜的洗胃方法，能提高此类中毒患者的成功率，也是本研究课题设计的主要背景[5]。
3.2 中毒表现
本实验因灌胃致死剂量的沙蚕毒素类杀虫剂，故观察到的小鼠均为重度沙蚕毒素中毒。但在人体由于沙蚕毒素在体内的代谢途径，包括吸收、转化及排泄均较快，所以其中毒表现为有可逆性，持续时间短，并且逐渐减轻，病程短[6]。但是，部分重度中毒患者仍导致呼吸衰竭，正因为病程短，所以相对而言进展迅速，在发生呼吸衰竭前，临床观察常常为无特异性中毒症状，对沙蚕毒素中毒的程度极易造成医生评估不足，而延误了抢救的时机。严重中毒者，首先表现为意识改变、烦躁、抽搐，甚至昏迷。其次，呼吸肌麻痹可导致迅速呼吸衰竭。最后，有研究发现沙蚕毒素进入体循环后的放射性分布情况，按分布浓度由高到低排序依次为：肾、肝、脾、肺、心、脑、红细胞。所以大量中毒可致心、肝、肾等多器官功能脏器衰竭。实验室表现，可发现全血胆碱酯酶大多有轻度的下降，而极个别患者才会有胆碱酯酶明显降低的情况出现。从上述表现，我们可以看出，针对此类中毒患者，早期发现，诊断，早期综合治疗占有十分重要的地位，而洗胃是早期综合治疗中重要的一环，效果好坏直接影响患者的预后，因此，筛选出最适宜的洗胃方法，具有重要意义[7]。
3.3 中毒后的洗胃治疗
中毒患者均强调综合治疗[8]，包括沙蚕毒素中毒，其他治疗方法在本研究中暂不做讨论，本研究专注于不同洗胃方法的效果对比。曾有类似研究表明，洗胃首选碱性液，用2%碳酸氢钠液，原理是碱性液体促使毒物分解，而导泻液体则可用油类的泻剂，比如，家用的蓖麻油等[9]。但在本研究中碳酸氢钠组小鼠生存时间最短，分析原因为，灌胃前在小鼠体外，已经先用2%碳酸氢钠混合了杀虫单制作成混合液（1 ml含有4.70 mg沙蚕毒素类杀虫剂杀虫单），而当杀虫单遇到酸或碱，能迅速水解转化为沙蚕毒素，再灌胃，就迅速进入体循环，从而加速了中毒的过程，导致中毒后的死亡时间明显缩短[10]。但事实上，与临床抢救的实际情况（误服的杀虫单与胃液混合，送到医院，医生抢救时再灌注2%碳酸氢钠洗胃），先后顺序不同，需要进一步深入研究，此种不同带来的差异性影响[11]。在本实验中，观察到食用菜籽油组较为稳定，生存时间较长的原因分析为，油类含水分相对减少，而杀虫单在水中很容易溶解，油类的洗胃液大大影响了毒物的溶解到水中的过程，从而延缓了沙蚕毒素的生成，而且油类导泻作用较强，更进一步加速了毒物的排出[12]。
综上所述，食物菜籽油组生存时间长的原因为，减少沙蚕毒素的生成，并通过导泻加速排泄，为抢救患者赢得了宝贵的时间，油类洗胃方法可能是提高此类中毒患者抢救成功率的重要措施之一。
参考文献
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