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拼接式毛细管电泳柱后蛋白质荧光衍生微膜反应器的构建与性能研究

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4ӽ4h?ӭNvӤtzMvPRMKw_׿:j%N ?Z对照,使两者在相同条件下对相同浓度的BSA样品进行CZE分析,考察膜反应器对系统死体积及柱效的影响。实验中膜反应器的反应池内充满分离缓冲液。

相比于常规空管柱CZE分析,拼接式柱后衍生微膜反应器系统中的死时间和空管柱的死时间几乎相同, BSA峰宽说明柱效没有明显降低,相对于1 mm膜长反应器的CZE分析结果,分析系统的死体积大大降低,系统柱效得到显著提高。

3.6 分离能力和稳定性考察

用该微膜系统分离标准蛋白质BSA和Fetuin的混合物,结果如图8所示。两者分离度R=3.07,柱效分别为 1387和1285塔板数/m。

进一步对该系统的重复性及稳定性进行考察。连续进样3次, BSA和Fetuin保留时间的RSD分别为0.6%和0.3%;峰高的RSD分别为4.6%和3.2%。在连续进行35次后,微膜反应器依旧稳定,分离能力和柱效没有显著变化,说明其稳定性良好。

4 结 论

构建了拼接式毛细管电泳柱后蛋白质荧光衍生分离检测系统,考察了分离电压及衍生化试剂浓度等因素对衍生反应的影响,BSA浓度在0.007~0.04 mg/mL浓度范围内,荧光强度和样品浓度呈良好的线性关, BSA的检出限可达5.6 nmol/L。此反应器死体积较小,具有良好的稳定性和重现性。本研究为进一步将拼接式柱后衍生微膜反应器应用于复杂蛋白质样品的分离分析提供参考。

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