论苹果渣多酚抗氧化性质

摘要： 为研究苹果渣多酚的抗氧化性质，分别测定了苹果渣多酚对·OH的清除作用、对·O₂^-的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用。结果表明：苹果渣多酚提取物对·OH的清除能力、对·O₂^-的清除能力和脂质过氧化的抑制能力EC₅₀分别为5.7 mg /ml、6.7mg/ml和0.27mg/ml。苹果渣多酚提取物具有较强的抗氧化的作用。

关键词：苹果渣；多酚；抗氧化 

作者简介：靳学远（1955-），学士，安徽淮南人，副教授，从事天然产物化学研究和教学。

苹果中含有丰富的植物纤维、糖、矿物质、苹果酸、维生素、蛋白质和多酚类物质。苹果多酚(apple polyphenols，缩写为AP)是苹果中所含多元酚类物质的总称，在一些酿酒苹果品种中最高可达7g/kg(鲜重)^[1]。研究发现，苹果多酚的许多生理功能活性比茶多酚要高100倍以上^[2]，具有防衰老、抗肿瘤、抗突变、抗动脉粥样硬化、防治冠心病与中风等在内的多种药理功能^[3]。日本从未成熟的苹果中已开发出苹果多酚制品，我国的苹果资源丰富，然而其综合利用还较落后，苹果渣是果汁厂榨汁后产生的下脚料，含有多丰富的多酚类化合物，但长期以来，果汁厂将其作为废渣抛弃，造成了环境的极大污染和资源的严重浪费。作者采用苹果渣提取了其中的多酚物质，对其抗氧化活性进行研究。

1  材料与方法

1.1  材料和设备

    苹果渣为安徽萧县龙城食品厂提供；无水乙醇、氯仿、乙酸乙酯等为分析纯，原儿茶酸、三氯乙酸(TCA)、硫代巴比妥酸(TBA) 为Sigma公司产品。

WD2900B 格兰氏微波炉(中国顺德格兰氏电器公司)，751-GD紫外可见光分光光度计(上海分析仪器总厂)，旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）,SHZ-C型循环水式多用真空泵(河南省巩义市英峪电子仪器厂生产),电子天平(日本岛津公司)。

1.2  试验方法

1.2.1  苹果渣多酚的微波提取

精确称取一定量的苹果渣放入烧杯内。按比例加入70%乙醇溶液，然后把烧杯放入微波炉内，调节微波功率350 W，按提取时间240s进行提取。提取完成后，取出烧杯慢慢搅拌，放置2-3 min后，用真空泵将原料与溶剂减压抽滤分离，收集滤液，滤液用旋转蒸发器减压蒸馏回收乙醇，待乙醇基本除去后，加入一倍量的氯仿萃取，将下层(氯仿层)溶液在旋转蒸发器上回收氯仿，上层(水层)用3倍量的乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，加入无水MgSO₄除去残留水分，然后将萃取液过滤，得到的滤液用旋转蒸发器在50～60℃下减压蒸馏回收乙酸乙酯。将回收乙酸乙酯后的萃取液放入真空干燥箱中，在小于70℃下干燥，除去残余的乙酸乙酯，得苹果渣多酚。

1.2.2  多酚含量的测定  

标准曲线的制作：配制100mg/L原儿茶酸标准溶液。分别吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml原儿茶酸标准溶液，加入1ml Folin-酚显色剂、5ml 1mol/L碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10ml，混合均匀后，室温下避光放置1h，用UV-754紫外可见光分光光度计在760nm处测定吸光值。以吸光值（A0 对原儿茶酸浓度（C）进行线性回归分析，求得回归方程和相关系数分别为A=0.0723C-0.0092 r=0.998(P<0.01)。分析表明，原儿茶酸质量浓度在0.002~0.012mg/ml 时与吸光值具有良好的线性关系。

样品中多酚含量的测定：准确称取40mg苹果渣多酚化合物固体提取物，用蒸馏水溶解并定容至5ml，取1ml按标准曲线制作方法测定吸光值，计算多酚含量。

1.2.3  苹果渣多酚对·OH的清除作用

采用Fenton反应体系，·OH由EDTA-Na₂-Fe(Ⅱ)-H₂O₂产生，由于·OH可特异性地使番红花红T褪色，根据褪色程度用比色法来衡量·OH的含量。反应体系含pH7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml， 260 μg/ml番红花红T 0.2 ml， 3% H₂O₂ 0.8 ml， 2 mmol/L EDTA-Na₂-Fe(Ⅱ) 0.7 ml，再加入不同浓度的供试液0.8ml，混匀后于37℃保温30 min，然后于520 nm处测定A值。空白组以重蒸水代替供试液，对照组以重蒸水代替供试液和EDTA-Na₂-Fe (Ⅱ )，每个浓度组平行测定5份，求其平均值。实验结果以抑制率（E%）表示。

1.2.4  苹果渣多酚对·O₂^-的清除作用  

采用邻苯三酚自氧化法。具体操作是pH8.2的Tis-HCI缓冲液加0.1ml不同浓度的PRL,混匀后加入7mmol/L的邻苯酚0.3m1,混匀后在第4min时加入10mol/LHCI 1滴中止反应，在325nm波长下测A值，计算抑制率（E%）。

1.2.5  苹果渣多酚对自发脂质过氧化的抑制作用 

选用18~25 g雄性小鼠，饥饿过夜，颈椎脱臼处死，迅速取出肝脏放入冰浴的PBS缓冲液中，洗净剪碎，然后加入4℃PBS缓冲液进行匀浆，制成10%的肝匀浆，取0.6ml于试管中，加入不同浓度供试液1.0ml，对照组以蒸馏水代替供试液，混匀后于37℃水浴温孵2h，取出后加10%三氯乙酸2.0ml，0.67% 硫代巴比妥酸2.0ml，混匀后沸水浴15min，以4500r/min离心20min，取上清液在532nm处测定吸光度A值，以硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量，并计算抑制率（E%）。

2  结果与讨论

2.2.1  苹果渣多酚对·OH的清除作用

·OH是活性氧中最活泼的氧自由基之一，它几乎能与活细胞中任何分子发生反应，可介导机体组织脂质过氧化，蛋白质解聚、聚合，核酸断裂和多糖裂解等生化过程，引发组织细胞病变，导致各种疾病发生和加速机体衰老。减少此类自由基可预防衰老、心血管疾病，并具有防癌抗癌的作用。

 

        图1  苹果多酚对·OH的清除作用

 

由图1可见，苹果渣多酚对·OH自由基有较强的清除作用，达到50%清除率所需提取物浓度(EC₅₀)为5.7mg/ml。

2.2.2  苹果渣多酚对·O₂^-的清除作用

    不同浓度的苹果渣多酚对·O₂^-的清除作用见图2。

 

                  图2  苹果多酚对·O₂^-的清除作用

由图2可见，苹果渣多酚对·O₂^-自由基有较强的清除作用，达到50%清除率所需提取物浓度(EC₅₀)为6.7mg/ml。

2.2.3  苹果渣多酚对自发脂质过氧化的抑制作用

  脂质过氧化反应会损伤生物膜，丙三醛(MDA)推荐访问:抗氧化 性质 苹果 多酚